Microscopia de Expansão

Métodos de super-resolução microscópica  estão amadurecendo e estão se tornando mais amplamente utilizados para a descoberta científica. No entanto, a maioria dos métodos permanecem tecnicamente desafiadores e envolvem hardware  ferramentas de software sofisticados. Em 2014, o grupo de Ed Boyden no Instituto de Tecnologia de Massachusetts introduziu microscopia de expansão (missão exploratória) para gerar imagens de super-resolução ( Ciência 347 , 543548 , 2014 ). O conceito por trás da ExM é incrivelmente simples. As etiquetas são afixadas a alvos de interesse dentro de uma amostra e, em seguida, a amostra é expandida para cerca de quatro vezes o seu tamanho original e fotografado com microscópios convencionais. Pode-se dividir a resolução obtida nestas imagens de difração limitada pela expansão da dobra, e assim conseguir uma melhoria aproximadamente quatro vezes na resolução.

Embora o método original servisse para entregar imagens de super-resolução nas mãos de qualquer pessoa com um microscópio convencional, versatilidade ExM foi limitado por detalhes técnicos como a necessidade de sondas de rotulagem especial. No entanto, várias melhorias ao método ExM original foram publicadas em 2016, o que aumentou a sua aplicabilidade geral. Três artigos publicados dentro de alguns meses de cada outras alterações introduzidas no protocolo original que fez missão exploratória compatível com sondas convencionais, tais como anticorpos disponíveis comercialmente rotulados e proteínas fluorescentes endógenos ( Nat Métodos. 13 , 485488 , 2016 ; .. Nat Biotechnol 34 , 987992 , 2016 ; Nat Biotechnol.. 34 , 973981 , 2016 ). Além disso, o método tem sido alargada para permitir fluorescência in situ fluorescente (FISH) de ARN, permitindo medições de melhoria quantitativa única molécula-FISH (smFISH) em tecidos ( Nat Métodos. 13 , 679684 , 2016 ).

Maiores avanços estão no horizonte. Perguntas óbvias, como e se a ExM pode ser combinada com a microscopia de super-resolução convencional, devem ser investigadas. Além disso, a aplicação da ExM a importantes pesquisas em biologia, como explorar o connectome, pode ser dramaticamente avançada. Uma vantagem adicional de ExM é que amostras grandes ou densas não são apenas expandidas, mas também opticamente limpas no mesmo procedimento, removendo alguns problemas associados à imagem desses espécimes. Estamos ansiosos para ver o quadro maior com essas técnicas.

Fonte: http://www.nature.com/nmeth/journal/v14/n1/full/nmeth.4113.html

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